القياس الطيفي لقياس الألوان اللونية
البروتينات عادة ما تكون مزيجا من البروتينات. وتستند المقايسات اللونية على مكونات البروتين: تتفاعل الأحماض الأمينية (على سبيل المثال التيروزين والسيرين) مع مجموعة كروموجين إضافية أو صبغة لإنتاج مادة ملونة. يرتبط تركيز المادة الملونة مباشرة بعدد الأحماض الأمينية التي يتفاعل معها البروتين ، مما يعكس تركيز البروتين.
طريقة اللونية
هناك عدة طرق مثل BCA ، Bradford ، و Lowry.
طريقة Lowry: بناء على رد فعل أقرب Biuret وتحسينها. يتفاعل البروتين مع Cu2 لإنتاج تفاعل أزرق. ومع ذلك ، فإن طريقة Lowry أكثر حساسية من Biuret. العيب هو الحاجة إلى إضافة العديد من الكواشف المختلفة بالتتابع ؛ رد الفعل يستغرق وقتا طويلا. عرضة للمواد غير البروتينية ؛ البروتينات التي تحتوي على EDTA ، Triton x-100 ، وكبريتات الأمونيا ليست مناسبة لهذه الطريقة.
اختبار حامض Bicinchoniinine: هذا هو فحص البروتين أحدث وأكثر حساسية. يتفاعل البروتين المراد تحليله مع Cu2 في محلول قلوي لإنتاج Cu ، الذي يشكل مخلب مع BCA لتشكيل مركب أرجواني مع ذروة امتصاص عند 562 نانومتر. العلاقة الخطية بين تركيز هذا المركب والبروتين قوية ، والمركب الذي يتكون بعد تفاعله مستقر للغاية. بالنسبة إلى طريقة Lowry ، فإن العملية بسيطة والحساسية عالية. ومع ذلك ، تشبه طريقة Lowry ، فهي عرضة للتداخل مع البروتينات والمنظفات.
طريقة برادفورد: مبدأ هذه الطريقة هو أن البروتين يتفاعل مع Coomassie Brilliant Blue لإنتاج مركب ملون يمتص عند 595 نانومتر. وتتمثل أهم ميزاته في حساسيته ، وهي 2 أضعاف مستوى Lowry و BCA. إنه أبسط وأسرع. إنه يتطلب نوعًا واحدًا من كاشف التفاعل. يمكن أن يكون المركب مستقرا لمدة ساعة واحدة لتسهيل النتيجة. تتداخل مع Lowry ، تتفاعل BCA مع عوامل خفض (مثل DTT ، mercaptoethanol) متوافقة. ومع ذلك ، فإنه لا يزال حساسًا للمنظفات. العيب الرئيسي هو أن المعايير المختلفة يمكن أن تؤدي إلى اختلافات كبيرة في نتائج نفس العينة وأي نتائج مماثلة.
قد يتم الخلط بين بعض الباحثين الذين يتعرضون لقياسات اللونية للمرة الأولى من نتائج الاختبارات اللونية المختلفة. ما نوع الأساليب التي تعتقد أنها مشوشة؟ يرجع ذلك إلى حقيقة أن المجموعات تفاعلت بطرق مختلفة ولم تكن المجموعات الصبغية متماثلة ، ويتم استخدام العديد من الطرق في وقت واحد لجعل تركيزات العينة من نفس العينة غير متناسقة. على سبيل المثال ، Keller et al. اختبرت البروتين في حليب الإنسان ووجدت أن التركيزات التي تم قياسها بواسطة Lowry و BCA كانت أعلى بكثير من برادفورد. كان الفرق كبيرا. حتى إذا تم تحديد العينة نفسها ، فإن العينة القياسية المحددة بنفس الطريقة اللونية غير متناسقة ، والتركيز بعد الاختبار غير متناسق أيضًا. على سبيل المثال ، استخدم Lowry لاختبار البروتين في جناسة الخلية ، باستخدام BSA كمعيار ، بتركيز 1.34 مجم / مل ، وجلوبيولين كمعيار بتركيز 2.64 مجم / مل. لذلك ، قبل اختيار طريقة قياس الألوان ، من المفضل الإشارة إلى التركيب الكيميائي للعينة المراد اختبارها ، وإيجاد بروتين معياري مماثل كيميائيًا كمعيار. بالإضافة إلى ذلك ، غالباً ما تسبب الطريقة اللونية لقياس البروتينات مشاكل في أن قيمة الامتصاص للعينة منخفضة جداً ، مما يؤدي إلى فرق كبير بين تركيز العينة المقاسة والتركيز الفعلي. تكمن المشكلة الرئيسية في أن لون الجزء المهم من مقياس الطيف الضوئي 1011 ، وهو الكوفيت ، له عمر نصف معين ، لذلك تسرد كل طريقة قياس الألوان زمن اختبار التفاعل. يجب اختبار جميع العينات (بما في ذلك العينات القياسية) في هذا الوقت. إذا كان الوقت طويلاً ، تصبح قيمة الامتصاص التي يتم الحصول عليها أصغر ويتم تقليل قيمة التركيز المحول. بالإضافة إلى ذلك ، فإن درجة حرارة التفاعل ، وقيمة الأس الهيدروجيني للحل ، وما إلى ذلك كلها عوامل مهمة تؤثر على التجربة. بالإضافة إلى ذلك ، من المهم جدًا استخدام قياس الألوان اللوني. تجنب استخدام الترعة المصنوعة من الكوارتز أو الزجاج لأن اللون بعد التفاعل سيسبب تلوين الزجاج أو الزجاج ، مما يؤدي إلى امتصاص دقيق للعينة.
الشركة متخصصة في بيع أجهزة قياس الطيف الضوئي ، نرحب بالعملاء الذين لديهم حاجة للتشاور والشراء ، وسوف نقدم لك خدمة صادقة ومنتجات ذات جودة عالية ، فضلا عن انخفاض الأسعار.
البريد الإلكتروني: info@sumerlab.com
الويب: sumerinstrument.com